Servicios / Secuenciación de ácidos nucléicos

El servicio de secuenciación de DNA se realiza por “Extensión del iniciador” sobre productos de PCR o plásmidos usando iniciadores universales o aquellos escogidos por el cliente.

En caso de tratarse de fragmentos de PCR, el servicio incluye su purificación, previa a la reacción de secuenciación.

Las muestras, los iniciadores respectivos, así como su secuencia deben ser enviados a CorpoGen según las siguientes especificaciones:

MUESTRA	CONCENTRACIÓN	VOLUMEN
DNA plasmídico	100 ng/µl	20 µl/reacción
Fragmento de PCR	50 ng/µl	50 µl/reacción
Iniciadores	5 pmol/µl	10 µl/5 reacciones

Generalmente la concentración es adecuada, si 1µl del producto es visible en una electroforesis en gel de agarosa como una sola banda. Anexar una foto de la electroforesis del producto de PCR.

En los casos en que la temperatura de anillaje de los iniciadores a usar en la secuencia sea superior a 60°, existe la posibilidad de que la reacción de secuenciación no sea exitosa.

Se dispone para la secuenciación los iniciadores universales listados a continuación:

INICIADOR UNIVERSAL	SECUENCIA ( 5´- 3´)
M13F(-20)	GTA AAA CGA CGG CCA GT
M13R(-20)	GCG GAT AAC AAT TTC ACA CAG G
M13F-pUC(-40)	GTT TTC CCA GTC ACG AC
M13R-pUC(-40)	CAG GAA ACA GCT ATG AC
T7	AAT ACG ACT CAC TAT AG
T7 Promoter	TAA TAC GAC TCA CTA TAG GG
T7 terminator	GCT AGT TAT TGC TCA GCG G
T3	ATT AAC CCT CAC TAA AG
SP6	ATT TAG GTG ACA CTA TAG
BGH-rev	CTA GAA GGC ACA GTC GAG GC
pGEX5	GGC AAG CCA CGT TTG GTG
pGEX3	GGA GCT GCA TGT GTC AGA GG
27F	AGA GTT TGA TCM TGG CTC AG
1492R	TAC GGY TAC CTT GTT ACG ACT T

El tiempo de entrega de los resultados es de dos semanas, después de recibir la orden de servicio.